- 张灵霞;吴雪琼;董恩军;
目的构建结核分枝杆菌esat6-卡介苗重组疫苗,研究其免疫原性及抗结核作用,以期获得结核病预防性或治疗性疫苗。方法通过基因工程重组技术将结核分枝杆菌保护性抗原esat6的编码基因与穿梭质粒载体pYUB295重组,采用电穿孔技术导入卡介苗中,应用聚合酶链反应(PCR)扩增、聚丙烯酰胺凝胺电泳(PAGE)鉴定重组卡介苗。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测其血清中特异性抗体,用MTS法分析其脾淋巴细胞增殖指数。通过观察esat6-卡介苗重组疫苗对结核分枝杆菌感染的预防试验中实验动物半数死亡时间、一定时间内的死亡率、大体病变、T细胞及B细胞免疫功能等指标评价esat6-卡介苗重组疫苗对结核分枝杆菌感染的预防效果。结果PCR扩增、限制性内切酶酶切、DNA测序鉴定、PAGE电泳表明成功地构建了esat6基因pYUB295重组质粒,ESAT6蛋白在卡介苗中分泌表达。重组卡介苗免疫原性试验表明:esat6-卡介苗重组疫苗组有ESAT6特异性抗体产生,45d时达到最高水平。脾淋巴细胞增殖试验表明各组刺激指数均达2.0以上,esat6重组卡介苗免疫组小鼠脾淋巴细胞的刺激指数稍高于对照组。预防试验表明:esat6-卡介苗重组疫苗组、卡介苗组与生理盐水对照组比都能延长结核分枝杆菌感染小鼠的半数死亡时间,降低2个月内的死亡率。其中esat6-卡介苗重组疫苗组效果显著,与卡介苗组比有显著差异。结核分支杆菌攻击后2个月,处死小鼠时,小鼠脏器大体病变及脏器培养结果表明:esat6-卡介苗重组疫苗免疫组小鼠比其他各组小鼠结核菌的负荷轻。抗体检测结果及淋巴细胞增殖实验各组结果差异无统计学意义。结论正确构建了esat6-卡介苗重组疫苗,esat6-卡介苗重组疫苗能提高卡介苗对结核分枝杆菌感染的预防作用。
2010年01期 v.39 3-6页 [查看摘要][在线阅读][下载 133K] [下载次数：253 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：1 ] - 段朝霞;刘锋;冯云;杨林花;
目的探讨组织因子(TF)、组织因子途径抑制剂(TFPI)-1、2在乳腺癌转移中的作用。方法106例乳腺癌患者血液和组织标本,根据肿瘤大小、淋巴结转移情况、TNM分期分别分组。同时设立健康对照组。酶链免疫吸附试验(ELISA)法检测血浆TF、TFPI-1、TFPI-2浓度;免疫组织化学染色观察TF、TFPI-1、TF-PI-2的组织表达。结果乳腺癌组TF以及TFPI-1血浆浓度均高于对照组[对照组TF浓度(0.63±0.24)U/L,TFPI-1浓度(80±19)μg/L];TFPI-2各组比较差异无统计学意义。TF血浆浓度在乳腺癌>2cm组为(1.76±0.42)U/L,较<2cm组(0.83±0.24)U/L增高;淋巴结转移阳性组较淋巴结转移阴性组高2倍;Ⅲ/Ⅳ期(1.8±0.4)U/L高于Ⅰ/Ⅱ期(0.9±0.3)U/L(P<0.05)。Ⅲ/Ⅳ期TFPI-2血浆浓度(3.0±1.2)μg/L显著低于Ⅰ/Ⅱ期(5.1±1.2)μg/L(P<0.05)。TF在乳腺癌>2cm组及淋巴结转移阳性组表达平均秩次分别为150.09、157.01,分别较<2cm组(111.23)、淋巴结转移阴性组(109.16)高表达;Ⅲ/Ⅳ期(162.58)较Ⅰ/Ⅱ期(112.47)表达增强(P<0.05)。ⅢI/Ⅳ期乳腺癌TFPI-2表达则较Ⅰ/Ⅱ期降低,2组表达平均秩次分别为59.92、98.94;>2cm组(50.97)表达<2cm组(94.37);TFPI-1血浆浓度及组织表达在乳腺癌各组差异无统计学意义(P>0.05)。结论乳腺癌高表达TF,TF与乳腺癌肿瘤直径、淋巴结转移及其TNM分期有关,其高表达参与了乳腺癌的生长和转移。TFPI-1在肿瘤生长和浸润中的作用尚不能肯定。TFPI-2在乳腺癌细胞的表达与肿瘤的生长与转移关系密切,其低表达与乳腺癌的进展相关。
2010年01期 v.39 7-9页 [查看摘要][在线阅读][下载 107K] [下载次数：71 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：1 ] - 赵明芳;曲晶磊;曲秀娟;侯科佐;张晔;刘静;刘云鹏;
目的从MCF-7B乳腺癌细胞培养上清液中分离获得Exosomes,并进行形态学观察鉴定。方法通过低速、高速、超滤及超高速离心等方法,从MCF-7B乳腺癌细胞培养上清中分离Exosomes,用透射电子显微镜观察其形态特征,Lorry方法蛋白定量,通过用免疫印记进行组织相容性抗原(MHC)分子鉴定。结果MCF-7B乳腺癌细胞上清中分泌大量的Exosomes,电镜下观察呈椭圆形或圆形的双层膜的囊泡,直径为50～100nm,具有完整的细胞膜。结论用离心的方法可从MCF-7B乳腺癌细胞培养上清中提取Exosomes,有可能作为乳腺癌免疫治疗潜在的抗原,同时也为研究肿瘤的发病机制提供一个新的途径。
2010年01期 v.39 10-12页 [查看摘要][在线阅读][下载 92K] [下载次数：131 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：3 ] - 段满乐;郭金英;王亚飞;
目的探讨应用RNAi技术沉默信号转导和转录激活因子(STAT3)基因对肝癌HepG2细胞的影响。方法针对STAT3 mRNA序列设计合成3对编码小干扰RNA(SiRNA)的DNA模板,构建pGenesil-1-shRNA-STAT3重组质粒,转染人肝癌细胞HepG2细胞。通过半定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot检测STAT3基因mRNA和蛋白水平的表达情况,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验检测转染后细胞增殖的变化。结果成功构建了pGeneSil 1-shRNA-STAT3重组质粒,并转染HepG2肝癌细胞;半定量RT-PCR、Western blot结果显示,重组质粒转染组细胞的STAT3基因表达在mRNA及蛋白水平上显著低于对照组;MTT实验结果显示,重组质粒转染组细胞的增殖明显受到抑制。结论pGeneSil 1.0-shRNA-STAT3转染HepG2肝癌细胞后,可有效抑制STAT3的表达,并抑制肝癌细胞的生长及增殖。
2010年01期 v.39 13-16页 [查看摘要][在线阅读][下载 180K] [下载次数：111 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ] - 王靖宇;李丽君;韩瑞发;
目的探讨卡介苗(BCG)电转化中影响转化效率的因素。方法利用电转化仪将穿梭质粒pYL-hB7-2转入BCG中,考察其影响因素并优化转化条件。转化子利用卡那霉素抗性筛选和聚合酶链反应(PCR)及酶链免疫吸附试验(ELISA)鉴定。结果重组BCG获得较高的转化效率,最高可达8/9。外加电场强度和质粒浓度是决定电转化效率的关键因素,感受态细胞的状态,如生长期和冰浴时间均可影响转化效率。结论成功解决了基因重组BCG构建过程中电转化的问题。
2010年01期 v.39 17-19页 [查看摘要][在线阅读][下载 93K] [下载次数：184 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：1 ] - 刘海瑛;李莉;张华屏;
目的检测体外培养子宫腺肌病在位内膜腺上皮细胞中细胞周期蛋白A(CyclinA)与p27蛋白的表达,探讨CyclinA及p27蛋白与子宫腺肌病的发病关系。方法体外培养子宫腺肌病在位内膜腺上皮细胞,用Western-blot法定量检测CyclinA和p27在子宫腺肌病组、对照组(子宫肌瘤组)培养细胞中的表达。结果子宫腺肌病组腺上皮细胞中CyclinA表达高于对照组(P<0.05),p27表达低于对照组(P<0.05)。结论子宫腺肌病的发病也可能与细胞周期调节失控导致细胞不正常生长,增殖活性改变有关。
2010年01期 v.39 20-22页 [查看摘要][在线阅读][下载 96K] [下载次数：148 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：1 ]